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1、測定多肽，一般采用什么液相色譜分析柱?流動相是乙腈和水，還有微量的TFA。特別是像類似三肽的短肽，應該怎么選擇液相色譜分析柱?
答：分子量不高的多肽一般選用常規C18柱就能測定，也有用離子交換柱、水性C18柱和Hilic親水作用柱的。
2、氨基柱在進酸性樣品時，很傷液相色譜分析柱，如使用一段時間后，柱效降低，峰形改變，如何恢復?
答：氨基柱測酸性樣品，應該是用氨基柱的HILIC模式。酸的存在可能會使略帶負電荷的氨基官能團質子化，導致使用一段時間后對于某些類的分析物保留性質有所改變或表現在柱效下降。建議：用5-10倍的柱體積的含0.5-1.0%NH3的乙腈-水(50:50)溶液沖洗該柱(沖洗后當然要再用不含堿的流動相洗去多余氨)，之后再進行分析這類酸性分析物時建議在流動相中略微添加少許氨如0.1%。
3、液相色譜分析柱的技術都有哪些?比如封尾等，這些技術在應用時都體現在哪里?
答：色譜柱技術包括填料技術和裝柱技術，填料技術自不待言，填料的好壞對色譜柱分離性能和選擇性有決定性影響。裝柱技術也沒有想象中的這么簡單，不同固定相、不同粒徑、不同柱管內徑和長度，裝柱工藝都有所不同，要裝出緊密、穩定、均一的柱床，更多是一門藝術，需要經驗積累。
國內和國外想比，我認為色譜柱的差距在于：國內公司以前都不會自己開發填料，一般買國外現成填料裝柱，買到的填料質量控制權不在自己手里。另外因為裝柱歷史短，經驗積累少，裝柱工藝也沒有*達到國外水平。另外，對色譜柱性能很關鍵的基礎材料-----裸硅膠，國產的還不過關，在純度、粒徑和孔徑的均一性方面和國外產品相比，差距很大。
4、液相色譜分析柱在什么情況下可以清洗一下篩板呢?原來也討論過這個問題，我也拆下來清洗過，但我看到柱前段的污染更甚，于是就用刀片刮了刮，然后把清洗好的篩板安裝上去。問題解決了，但使用壽命會不會減少呢?
答：液相色譜分析柱柱頭污染了，就取出污染的，再裝一些填料。因為加入你刮了些填料，那么微觀的塔板數就少了。假入你刮得不多，僅表面，可能就是一些臟物，所以問題解決。但是今后還會有同樣問題，再掛，那么不小心刮，影響柱效。建議還是裝一個預柱。
5、如果液相色譜分析柱取下來放置一段時間，需要做什么保護嗎?
答：對一般的反相柱，也就是洗干凈后放到純甲醇(乙腈)或者是80%左右的甲醇(乙腈)水中，然后用堵頭塞緊柱兩頭，以免保存溶劑揮發，應該不需要做特殊的保護。
6、網上對液相色譜分析柱是否可以反沖一直有爭論，那什么樣的柱子可以反沖，什么不可以。反沖后是正者用，還是反著用。具體到各型號柱子不僅是ODS柱，其他如正向柱、氨基柱、離子交換柱等都有解釋。
答：一般的正相反相柱應該都能反沖，只有兩端篩板孔徑不對稱的柱子不能反沖，不過目前這樣的柱子已經比較少見了。反沖是為了把柱頭的污染物沖洗掉，反沖后還是正著用比較好，以免柱子的兩頭都被污染。我們一直提倡的是：正向使用，反向沖洗。
7、流動相中加入適量的四氫呋喃可以改善峰形的機理是什么?
答：《液相色譜方法及應用》于世林編著的上面說：甲醇為質子給予體、乙腈為質子接受體、四氫呋喃是偶極溶劑，應該除了極性影響，還有另外的影響因素，至于分離機理，還是比較復雜的，不能看成是個方法。
8、預柱或保護柱用還是不用的問題!原來分析中藥品種時，我一直都是用保護柱。但來到新公司后，發現大家都沒有使用，幾個實驗室連保護柱都沒找到一個，也就是說大家從來都沒有用過。后來問一個老員工，說是有可能影響藥品分析。我就想問：安裝保護柱后會影響樣品分析嗎?我們做的大多是頭孢類的抗生素。
答：應該這樣說，加上保護柱，肯定有利于保護色譜柱不受一些顆粒物質的堵塞，肯定有害于分離度和柱效，因為保護柱中間有著死體積的存在。但是如果保護柱接得好，并且盡量控制其匹配性和經常更換，分離度和柱效應該影響并不大。
頭孢類的抗生素也要看到底是原料藥還是制劑嘍，有些原料藥，可以根據液相色譜分析柱的損耗選擇添加預柱(中間是個篩板)，制劑的話，如果有輔料嚴重干擾或者流動相鹽分比較大，那還是配個保護柱。
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